细胞铺板时，常出现的细胞分布不均匀现象。
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铺板成功的关键在于（1）细胞一定要消化好！！（2）铺板前要混匀！把可能的细胞团尽可能分开！！
细胞铺板实验
主要分为3大步骤：收集细胞→细胞计数→细胞铺板。
一、收集细胞，制作单细胞悬液
这里需注意：
· 消化细胞需要选择适用的消化液、适当的消化温度和时间。建议新手或者养的是一个新细胞时，自己要观察最佳胰酶消化时间及浓度。
· 消化后需要轻轻拍打细胞贴壁面，震落细胞。
· 一般用1000rpm/min离心即可，离心力太大细胞容易抱团！
· 离心后，要充分悬浮！悬浮离心后的细胞团时，先不要把所有液体都加进去！一般先加2mL液体，然后用1mL移液器轻轻将细胞吹起（注意不要有气泡），细胞要像云雾一样散开，这样易于形成单细胞。此外，吹散次数过多也会影响细胞活力，所以要熟练操作，尽快上板。
二、细胞计数
取10 微升加4%台盼蓝计数活细胞。
三、细胞接种
需要根据实验目的选择不同规格的培养板。
① 稀释细胞：根据细胞计数结果后，将细胞稀释到目的浓度。
获得细胞悬液后要先根据选择的培养板的种类，以及要种的细胞密度调整细胞悬液的浓度，可在离心管中调整后反复颠倒摇匀，种板需要一步完成，切不可先加细胞后补液或先加液再补细胞。
tip：细胞密度对于铺板很重要，过密很容易造成细胞居中，细胞浓度过稀会造成细胞难以生长起来。
② 加入细胞悬液
（1）铺6孔板，12孔板或24孔板
为防止表面张力导致的中间液面太低细胞聚集的现象，通常在每一个孔加少量的无血清培养基，不用太多，浸润孔底即可。一般可加一个孔，浸润，再用移液枪移取，再加入第二个孔，浸润，依此类推。
如果培养液量少，由于瓶体内液体有向边缘吸的特性，所以造成中间低洼，细胞容易聚集，可以多加点液体缓解。
然后加入细胞悬液，从孔的左边靠近底部贴壁慢慢加入，这样加液后，细胞悬液会平铺在整个孔底，细胞分散较均匀，可以避免加在中间位置和加在周边晃匀后周边细胞局部太多的现象。
细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。如果有抱团的话，用手指从底部轻轻敲打，使之分散。
接下来，将板放在水平板面上“十字”形摇匀（上下左右四个方向进行移动，呈十字形状，重复5-6次），这一步很重要！不可以转圈摇，因为细胞会被带到中间。摇匀后要放工作台静置一下，等细胞贴壁了，轻轻移入到培养箱中。
（2）铺96孔板
可用排枪，每孔加入100微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部缓慢加入（加样过快容易导致细胞聚集）。加完半边板48孔后，将剩下的未加的细胞悬液再混一下，再继续加剩余的半边板子。
加完所有的时候，盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度，敲三次即可，太大力或次数太多会导致细胞集中成堆。将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，然后静置约5min，放置培养箱。
注意事项：
★ 用排枪吸取时，一定要保证每个枪头吸上来的悬液体积一致。
★ 如果是用于进行MTS等长时间测试时，最外圈应空余出来（中间60孔为最佳），加入PBS或细胞悬液（做空白或阴性对照），以防止培养基蒸发引起的边缘效应。
培养箱里面或者外面尽量不要放可以产生振动的仪器，比如离心机、涡旋器一类的仪器。
#细胞铺板不匀解决策略#
铺板不匀解决策略：
第一：对于96孔板，每孔通常加入100μL细胞悬液。加样方式为倾斜枪头，从孔的左边靠近底部缓慢加入（加样过快同样容易导致细胞聚集）。笔者建议，每加完半拉板子时，把细胞重新混匀，继续加样。加样结束后，镜下观察如有局部不均匀现象，可以采取敲击法，具体操作如下：将板子置于台面上，左手持住板子的左边，右手轻轻敲击板子的右边缘(5-8次)，力度太强或次数太多会反而更易导致细胞聚集。将板子顺时针旋转，依次敲击剩余三个边（据说逆时针效果不好），静置约5-10分钟后，放入37℃培养箱。
对于6孔板、12孔板或24孔板，为防止表面张力导致的中间液面太低细胞聚集的现象。通常每孔首先滴加少量培基，轻轻晃动浸润整个孔底以保证板子的孔底都是湿润的，这样加液后细胞悬液会平铺在整个孔底，可以避免加在中间位置和加在周边晃匀后周边细胞局部太多的现象，细胞分散会较均匀。注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下（5-10分钟）。镜下观察细胞均匀度，如不均匀可采用以下8字法、十字法及震荡法等方法进行细胞均匀度处理。具体操作如下：
第二 (8字法)：这种方法也是大家最常见的细胞摇匀方法。摇动次数根据镜下观察和个人力度具体分析（参考：保证液体不被晃动出去，8字晃动5次理论上就可以基本晃匀）。摇匀结束，切忌在镜下移动观察视野太久，以免伴随着轻微的移动，细胞又往中间聚集。
铺板培养3h，镜下观察细胞均匀度(40X)
第三 (十字法): 细胞铺完板后，在水平方向上，上下左右四个方向进行移动，呈十字形状，重复5-6次。有些同学觉得十字法摇匀效果并不好，方法关键的是摇完后最好直接放入培养箱中，不要再做过多的移动（也有同学建议可以在培养箱中摇匀）。另外，同样不建议放到镜下长时间去观察。
十字类似法：细胞铺完板后，放在水平板面上先上下移动，再左右移动，每个方向5-6次。其他具体操作同十字法。
铺板培养3h，镜下观察细胞均匀度(40X)
第四(震荡法)：细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。然后从底部敲击，使之分散。如果实验室有平板振荡器的话，建议用这个仪器稍振荡一下，效果不错，就是振幅小，频率高的那种。（不太推荐这种方法，板子接触振荡器后增加了染菌的风险，而且转速的调节和时间的掌握比较困难）。
